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HEPES中文全稱4-羥乙基哌嗪乙磺酸，CAS為7365-45-9，hepes緩沖液的主要成分是羥乙基哌嗪乙硫磺酸（2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid），HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。其{zd0}優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時能維持較恒定的PH值.在這種培養(yǎng)條件下,細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。
大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色.HEPES有些昂貴,在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒. 原則上,HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制.實(shí)際操作中并非如此簡單. 溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細(xì)胞生長也是很重要的。
HEPES使用方法有兩種：
(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾cj。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2，濾過cj后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。
(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液，最終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾cj，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
4-羥乙基哌嗪乙磺酸對細(xì)胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/LHEPES即可達(dá)到緩沖能力?？捎糜谏锞彌_劑；分離與分析RNA核組分的反應(yīng)緩沖液、預(yù)雜交緩沖液、雜交緩沖液；用于RNA與T4RNA。分子生物學(xué)級用于用T4RNA連接酶Chemicalbook進(jìn)行RNA3'-末端標(biāo)記，分離與分析核RNA之反應(yīng)緩沖液組分、預(yù)雜交緩沖液緩和雜交緩沖液成分。細(xì)胞-細(xì)胞黏附，細(xì)胞短期聚集培養(yǎng)，清洗組織、細(xì)胞所用緩沖液。
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